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          探討免疫細胞轉染時要注意的一些基本事項

          發布時間: 2022-09-12  點擊次數: 103次
             理想的免疫細胞轉染法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小、重復性好、安全、簡單等優點。病毒介導的轉染技術,是目前轉染效率高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但病毒轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有很強的選擇性,在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法則各有其特點。
            免疫細胞轉染時我們應注意的一些要點如下:
            1.如為貼壁生長細胞,一般要求在轉染前一日,必須應用胰酶處理成單細胞懸液,重新接種于培養皿或瓶,轉染當日的細胞密度以70-90%(貼壁細胞)或2×106-4×106細胞/ml(懸浮細胞)為宜,在轉染前4h換一次新鮮培養液。
            2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質,無RNA和其他化學物質的污染,OD260/280比值應在1.8以上。
            3.培養基中的抗生素
            抗生素是影響轉染的培養基添加物。這些抗生素一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率降低。所以,在轉染培養基中不能使用抗生素。
            對于穩定轉染,不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素,因為這些抗生素是選擇性抗生素的競爭性抑制劑。另外,為了保證無血清培養基中細胞的健康生長,使用比含血清培養基更少的抗生素量。
            4.設置陽性對照和陰性對照。
            5.一般在轉染24-48h,靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的,24-48h后即可進行靶基因表達的檢測實驗。
            6.如若建立穩定的細胞系,則可對靶細胞進行篩選,根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物,常用的真核表達基因載體的標志物有潮霉素和新霉素等。
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