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          怎樣辨別是否細胞污染?

          發布時間: 2022-11-01  點擊次數: 167次

          培養細胞最擔心的就是細胞污染,這期繼續分享如何辨別細胞污染的經驗。

           

           

          ★識別支原體污染

          這是一種很難發現卻經常存在的問題。

          • 支原體是最小的(0.3 μm)能夠自我復制的有機體,倒置顯微鏡下通常觀察不到。

          • 支原體沒有細胞壁,對常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺的,可能直到出現了可以觀察到的病變或發現細胞正常功能喪失的時候,才意識到是發生了支原體感染。

          • 在沒有采用特殊的染色方法,也沒有觀察到病變的情況下,實驗總是不成功,就應懷疑被支原體污染。預防支原體污染的惟-途徑是經常對細胞進行篩選。

             

           

          ★防止支原體感染

          • 只使用那些證明沒有污染支原體的血清和培養基。

          • 只接受那些保證沒有支原體感染的細胞。

           

          注意:當你怎么樣也得不到一種細胞表面蛋白的抗體,或不能有效地表達某種蛋白質時,可能是由于使用了被支原體感染的細胞。

           

           

           

           

           

          ★檢測支原體感染

          如果這株細胞對你十分重要,那么就應該每4~6周對細胞進行檢測,通常使用下面幾種方法:

          ●支原體的熒光染色是簡單、便宜也是常用的方法。

          ●使用支原體的特異引物進行PCR檢測。如果實驗室具備PCR儀和電泳條件,那么這種方法可能是尤為簡單的手段??梢宰约涸O計引物(設計好恰當的對照),也可以從公司購買引物。

          ●把細胞樣品送到能進行支原體檢測的公司檢測。這樣做雖不如自己檢測快(盡管托給公司比較容易,但會很貴),只有一個好處就算是不用自己親自動手。

           

          注意:如果你發現了支原體污染

          ●合適的方法是立即把細胞丟棄,從新復蘇。

          ●可以不理會它。

          ●可以采取某些挽救措施,但是會很困難,只適用于那些不可代替的細胞。簡單的方法是訂購除去支原體的試劑盒。

           

           

           

          ★交叉污染

          細胞還可能被別的細胞污染,這種交叉污染可能更廣泛,許多實驗人員在不經意之間培養、使用和凍存了其他的細胞。

          如何避免交叉污染:

          ●只從有保障的地方得到細胞,或者自已檢查細胞。

          ●不要同時操作多株細胞。不要把多種培養瓶同時放在超凈臺內。

          ●不要使用同一個移液管操作多種細胞。

          ●不同細胞株不要使用同一瓶培養基或胰蛋白酶。

          ●操作后不要把移液管放回培養基的瓶中。

          ●培養維護時,使用栓塞式移液管。

           

          注意:

          如果你的細胞生長情況或功能突然發生了變化,在排除支原體污染后,檢查你的細胞是否發生了交叉污染(這些變化也可能是發生了突變或漂變)。

           

           

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