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          細胞污染如何識別?

          發布時間: 2022-11-01  點擊次數: 194次

          在培養細胞過程中,同學們最擔心的就是細胞污染。因此,今天給大家分享如何辨別細胞污染的經驗,趕快學起來吧~


          一、肉眼觀察

          把培養瓶或培養皿拿起來,對者光線檢查

          ●渾濁情況:即使細胞密度很高,培養基也應該是透明的。輕輕移動或晃動培養瓶,觀察培養基的渾濁或懸浮情況,一些霉菌可能會在培養基的表面形成菌落。

          ●培養基顏色的變化。酸性條件下,加了酚紅的培養基會由紅變黃,而堿性條件下會變成紅紫色。細菌污染常常會使培養基變成黃色,真菌污染會使培養基變成深紫紅色。

          注意:丟掉細胞以前要仔細檢查一下,快速生長和生長過量的細胞培養基也會變黃。當培養箱中CO2的濃度變化時培養基的顏色也會變成黃色(CO2濃度太高)或是粉紅色(CO2 濃度太低)。

          ●聞!當然不能打開瓶子去聞,把鼻子貼在瓶口聞,許多污染發生以后都會散發出易察覺的、特殊的氣味,甚至打開培養箱門就聞到了。


          二、顯微觀察

          在倒置顯微鏡下,先用低倍(10x)再用高倍(40x)物鏡(總放大倍數為400)觀察細胞培養皿或培養瓶中的細胞:

          ●其他有機體:在低倍鏡下,真菌的菌絲體成長棒狀,并橫穿整個視野,還可以觀察到酵母,有時呈小圓球形,有時還有芽。

          在高倍鏡下可以觀察到細菌,它們可能是棒狀或球狀,單獨成鏈或成團存在,它們也可能和細胞混在一起,并且明顯處于細胞內部,有些細胞可能已經裂解變得模糊。觀察時可能每兩個視野才出現一個污染(當然也算被污染了?。?,而且可能污染物是可以運動的。

          ●損傷細胞:感染會殺死細胞,可能導致每個細胞都裂解/細胞層從附著物上全剝離,更可能的是細胞變得不規則(或大或?。?,在低倍鏡下是黑色的粒狀。

          (1)懸浮細胞

          懸浮培養細胞比貼壁培養細胞更加難以顯微觀察,尤其是高倍顯微鏡下。

          ●將培養瓶或培養皿放在顯微鏡的載物臺上,靜置一會。將焦距對準器皿的底部,觀察那些輕微附著的細胞,因為它們可能已經接觸到了微生物。

          ●對準整個培養瓶焦距, 當發現細胞的時候,用細聚焦調節旋鈕調節,仔細檢查周圍的培養基有沒有污染發生。

          (2)貼壁細胞

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          三、制片觀察法

          如果你不能確定是否發生了污染

          ●制作濕涂片或染色片:取1 ml培養基離心,用50μl培養基或緩沖液重新懸浮細胞,滴一滴到載玻片,蓋上蓋玻片制成濕涂片;或涂片、固定并染色(甲基蘭或革蘭氏染液),在高倍鏡下觀察。

          ●將細胞在營養培養基或血瓊脂培養基上劃線,37℃培養3天。如果有菌落,那么細胞被污染了。

          ●取1 ml的細胞培養液至無菌的微量離心管中,37℃培養3天。觀察到渾濁物,做濕涂片顯微鏡觀察。


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